Klinisch Laboratorium Heilig-Hartziekenhuis Mechelsestraat 24, B-2500 Lier Tel.: 03-491 30 70 • Fax: 03-491 30 89

DocNr SOP.SER.A.4	Versie 3		Status Definitief	Auteur Céline Marsboom
Aangemaakt op 25/Jan/2023	Verstuurd op 30/Jan/2023	Geldig van 30/Jan/2023	Geldig tot 30/Jan/2026	Gearchiveerd op

Zenit PRO is een volautomatisch toestel, van slide-voorbereiding tot scanning/fotograferen en interpretatie van de slides. Volgende bepalingen worden uitgevoerd: screening en titraties van ANA, ANCA, nDNA en LKS.

Via algoritmes zal Zenit PRO voor ANA een classificatie maken op basis van een fluorescentie index (%): negatief (index: < 10%), onzeker (index: 10 - 20%), positief (index > 20%). Er is patroonherkenning voor een selectie patronen: AC-1 Homogeen, AC-2 DFS70, AC-4,5,29 Gespikkeld , AC-3 Centromeer, AC-6,7 Nucleaire dots, AC-8,9,10 Nucleolair, AC-15,16,17,18,19,20,22,23 Cytoplasmatisch patroon en AC-21 Reticulair/AMA. Deze intepretatie kan een hulpmiddel zijn maar mag niet gebruikt worden als eindresultaat. Elk beeld moet bekeken en geïnterpreteerd worden.

Het is een BRIANT-netwerkproject. Alle stalen van de verschillende ziekenhuizen worden gecentraliseerd in het labo in Lier. Het uitvoeren van deze analyses vindt plaats in Lier op toestel ZenitPRO, maar de interpretatie zal plaatsvinden in elk ziekenhuis via de Middleware (ZenitHUB en ZenitHUBIFA).

2. Toepassingsgebied

Met dit toestel worden volgende testen uitgevoerd:

• Screening en titraties van ANA
• Screening en titraties ANCA
• Screening en titraties nDNA antistoffen
• Screening en titraties van weefselantistoffen: AMA, ASMA, APCA, LKM as en LC1 as

3. Definities en termen

ANA: Anti-nucleaire antistoffen

ACA: Anti-cytoplasmatische antistoffen

ANCA: Anti-neutrofiele cytoplasmatische antistoffen

FITC: Fluorescein Isothiocyanate

LKS: Liver/Kidney/Stomach (Lever/Nier/Maag)

ASMA: Anti-smooth muscle antibody (Gladde spiercel antistoffen)

AMA: Anti-mitochondriën antistoffen

APCA: Anti-maagcel antistoffen

LKM as: Antistoffen tegen lever/nier/microsomen

LC1 as: Antistoffen tegen lever cytosol antigen type 1

nDNA as: native DNA antistoffen

PBS: Posphate Buffered Saline

4. Principe

Het principe van de methode is gebaseerd op indirecte immunofluorescentie. In een eerste incubatie stap binden de eventueel aanwezige antilichamen in het serum van de patiënt met de corresponderende antigenen op de cellen van de slides. Deze cellen verschillen per test (bijvoorbeeld ANA kit: Hep-2 cellen). In een tweede incubatie stap bindt het fluorescent gelabeld anti-humaan immunoglobuline de eventueel aanwezige antilichamen in het serum van de patiënt. Dit antigen-antilichaam complex kan gevisualiseerd worden met behulp van de fluorescentiemicroscoop.

5. Veiligheid

Zie algemene veiligheidsvoorschriften laboratorium, SOP.ORG.22: “Veiligheid & hygiëne”.

6. Reagentia en materiaal

• Zenit Hep-2 kit (55059)
• Zenit Anca E kit (50053) (6 wells) / ANCA E slide box (6 wells) (55566)
• Zenit Anca F kit (50055) (6 wells) / ANCA F slide box (6 wells) (55569)
• Zenit Anca E kit (50053) (12 wells)
• Zenit Anca F kit (50056) (12 wells)
• Zenit nDNA kit (50063) (6 wells)
• Zenit rKSL kit (50065) (12 wells)

• Slides
• PBS concentraat
• Positieve controle
• Negatieve controle
• Conjugaat IgG FITC
• Mounting medium
• Coverslips

• Gedestilleerd water
• Cupjes met deksel (bewaring controlemateriaal)
• Dilution trays

8. Werkwijze

Voor elke run wordt er een dagelijks onderhoud uitgevoerd (Zie 11.1 dagelijks onderhoud voor de run). Op maandag wordt er tevens een deel van het wekelijks onderhoud uitgevoerd voor de run (Zie 11.3 Wekelijks onderhoud op maandag voor de run). Na het uitvoeren van deze onderhouden kan er verder gestart worden met het opstarten van toestel/pc.

• Start het toestel en de pc op:
  • PC
    > Login: Zenit
    > Wachtwoord: tineZPRO
  • ZenitPRO
    > Login: Service
    > Wachtwoord: Service1

• Open de 3 MeLinDA programma's (deze moeten op de achtergrond lopen).
• Open het programma ZENIT HUB.
• Login met: MLTLIER; ww: Lier1234!
• Ga naar het tabblad 'Daily work'.
• Vink de type testen die je gaat uitvoeren aan.

• Druk op het icoon met proefbuizen om een lijst te krijgen met de openstaande orders.

• Het vraagteken voor een staal geeft aan dat er recent (< 3 maanden geleden) al eenzelfde test is uitgevoerd.
• Het schrijfbordje geeft aan dat er voor deze patiënt vorige resultaten gekend zijn.
• Klik op 'launch new session'.

• Kies het juiste lot per testtype (er kan slecht 1 lot per testtype / 1 lot per run gebruikt worden). De laatste 3 loten worden weergegeven. Bij ingebruikname van een nieuw lot kies je voor 'New lot' en breng je de gevraagde gegevens van de kit in.

• Klik op 'Enter work list' en klik op OK bij de pop-up.

• Kies ‘Full run’ op de home page.
• Druk op ‘Start IFA session’.

Stap1: Test
• Druk op 'load work list'.
• Selecteer de types van tests om uit te voeren.
• Druk op 'Next'.

Stap 2: Samples
• Vortex de stalen.
• Laad de stalen op de sample racks.
• Duid per rack het soort tube aan dat aangeboden wordt (1 soort per rack):
  > Sample tube (standaard aliquottubes)
  > Inpeco (staaltype van Mechelen)
• Aan de stalen zonder barcode kan een ID gegeven worden door op de gele bol te klikken.
• Stalen met weinig volume kunnen aangeboden worden in een cupje (rack 8). Deze kunnen makkelijk gelabeld worden met een kleine barcode (sysmex barcode printer).
• Druk op 'Finish'.

• De reeds aangevraagde testen worden weergeven per staal. Voor stalen zonder aanvraag kan hier de test manueel gekozen worden (groene bol).
• Bij ‘CTR types’ kan je de juiste controles kiezen. Deze worden ingezet volgens een schema (Zie 12.1 Schema controles per run).
• In het info scherm kan je zien hoeveel slides er uiteindelijk nodig zijn, hoeveel controles er gedraaid worden en hoeveel lege plaatsen er nog zijn.

• Slides moeten minstens voor 3/4 zijn gevuld. Wanneer een slide niet voor 3/4 is gevuld, kunnen er testen uitgevinkt worden door op de groene bol te klikken, deze blijven dan in de werklijst staan voor een volgende run. Bij twijfel kan je dit met klinisch bioloog bespreken.
• Kies ‘Next’.

Stap 3: Controls
• Laad de controles op de plaatsen aangegeven door het toestel (dopjes verwijderen).
• Controles worden bij het eerste gebruik overgebracht in een cupje dat voorzien wordt van de controle naam, datum en initialen.
• Controleer met ‘Quantity Volume’ of er genoeg controle materiaal aan boord is (elke controle apart aanduiden).
• Kies ‘Next’.
  
Stap 4: Reagents
• Laad de gevraagde reagentia op de posities aangegeven door het toestel. Verwijder de druppeldopjes. De barcodes van de flesjes worden ingelezen door het toestel.
• Controleer met ‘Quantity Volume’ of er van elk reagens genoeg aan boord is.
• Kies ‘Next’.
  
Stap 5: Dilutions
• Controleer of er genoeg plaatsen vrij zijn op de dilutieplaten.
• Indien er niet genoeg vrije wells zijn worden alle platen vervangen.
• Bevestig dat dit gebeurd is door op ‘clean used cuvettes’ te drukken.

• Controleer dat de aangeduide wells voor gebruik leeg zijn.
• Kies ‘Next’.
  
Stap 6: Slides
• Er verschijnt een pop-up om het juiste aantal coverslips/dekglaasjes te plaatsen.
• Plaats de dekglaasjes in de houder achteraan de eerste slide rack.
• Laad de nodige slides op de plaatsen aangegeven door het toestel.
• Kies ‘Next’.
• Er verschijnt een pop-up om de barcodes van de slides te scannen. Kies ‘Yes’.
• Er verschijnt een pop-up om de slide covers te laden (zwarte kapjes over de slides). (Deze worden niet gebruikt)
• Klik op 'Done'.

Stap 7: Summary
• Er verschijnt een pop-up om alle slides te verwijderen uit de slide parking.
• Trek het rek naar voor uit het toestel en controleer dat er geen slides meer aanwezig zijn.
• Klik op ‘Done’.
• Kijk na of er genoeg buffer en wash aanwezig is.
• Kijk zeker na dat de tube van de buffer niet meer aangesloten is op de wash fles (zwart) maar terug op de buffer fles (groen) (dagelijks onderhoud).
• Kijk na of de tube van de waste aangesloten is en dat de waste fles leeg is.
• Druk op ‘Start’ om de sessie te starten.
  

Stalen worden per site bewaard in een rekje in de koelkast van auto-immuniteit.
Archiveer de stalen in het juiste rekje in ZenitHUB. (zie 15.1 Archiveren van stalen)

Voer het dagelijks onderhoud uit. (Zie 11.2 dagelijks onderhoud na de run). Op vrijdag wordt er tevens een deel van het wekelijks onderhoud uitgevoerd na de run (Zie 11.4 Wekelijks onderhoud op vrijdag na de run).

9. Verwerken van de resultaten

• Open het programma ZENIT HUB IFA.
• Log in met je eigen gebruiksnaam en wachtwoord. Onder je eigen gebruiknaam zie je enkel de stalen van je eigen labo.
• Er verschijnt een lijst met sessies, klik op de sessie die je wilt valideren.
• Zet het beeld op ‘Advanced view’ om well per well te bekijken.
• Beoordeel elke well, dubbelklik op de foto om de volledige well te bekijken:
  • Negatief (-) / Positief (+).
  • Indien positief: kies het juiste patroon.
  • Indien nodig kan er bij ‘Observations’ commentaar geschreven worden. Deze commentaar wordt naar het LIS gestuurd en is zichtbaar als externe commentaar bij de bepaling.
  • Kies onderaan, indien nodig, extra verdunningen. Deze verdunningen worden de volgende run uitgevoerd.

• Wanneer je een well negatief of positief maakt verschijnt er een icoon van een pc waar het vraagteken stond. Het PC icoon betekent dat dit resultaat naar GLIMS wordt gestuurd.

- Er moeten nog verdunningen worden ingezet.
- Deze titer is niet de eindtiter.

• Indien er nog verdunningen ingezet worden moet dit icoon op een vraagteken blijven staan (PC-icoontje opnieuw aanklikken --> er verschijnt opnieuw een vraagteken). Zo wordt het resultaat nog niet naar GLIMS gestuurd.
• Geef bij verdunningen de hoogst positieve titer door via het PC-icoontje met het correcte patroon aangeduid (= eindtiter).
• Opgelet: Bij hogere negatieve titers laat je de well op een vraagteken staan anders wordt het positieve resultaat overschreven in GLIMS.

• Bij mengpatronen met verschillende titers zorg je ervoor dat de hoogste titer per patroon op het PC-icoontje staat. De andere verdunningen moeten op vraagteken staan.

• Met de groene pijlen kan je naar de volgende of vorige well gaan (zowel onder de eigen login als de superuser login), met de blauwe pijlen kan je naar de vorige/volgende slide gaan (de blauwe knoppen werken enkel in de supervisor login).

• Wanneer je twijfelt aan een bepaald patroon kan je gebruik maken van de cellatlas. Hier zitten voorbeelden in van alle patronen.

• Wanneer alle wells beoordeeld zijn kan er via 'Quick view' nagekeken worden of alle stalen correct beantwoord zijn. Maak hier zeker gebruik van.
• Klik op Finish (=vlaggetje) rechts onderaan in het scherm om de hele run af te werken.

• Ga terug naar het programma ZENIT HUB om de run door te sturen naar het LIS.
• Klik in het tabblad 'Daily works' op 'Validate results'.

• Vink de stalen aan om door te sturen naar het LIS en klik op 'Validate results'.

• De resultaten zijn nu doorgestuurd naar het LIS.

Klik op het icoon met het spook

• Kies de titer die je wilt doorgeven.
• Beoordeel de ghosttiter zoals een andere well (positief/negatief + duidt het correcte patroon aan).
• Zorg dat de ghosttiter op PC-icoontje staat.

• Zet de titers (= negatief) van de huidige run op vraagteken.
• Kijk bij “Patiënt Historiek”.
• Klik op groen vinkje.

• Klik het juiste patroon aan en klik op “Accept”.

• Deze titer (resultaat) zal verschijnen in de te valideren resultaten in ZenitHUB.

• Kijk bij ‘Patiënt historiek’ (linkerkant scherm).
• Druk op het filmrolletje (bij assay ANCA F).

• Links = formaline slide / rechts = ethanol slide.
• Dubbelklik op de afbeeldingen om de foto te vergroten en te navigeren in het beeld.

• Wanneer je bij een ANCA een atypisch/ANA interferentie patroon hebt waarbij geen ANA is uitgevoerd wordt dit bijgeregistreerd (afspraak stalen Lier). Laat de well op een vraagteken staan tot de ANA is uitgevoerd. Afhankelijk van dit ANA resultaat kan er voor de ANCA atypisch of ANA interferentie worden doorgegeven. (Breng de aflezer van devolgende dag op de hoogte dat dit nog geantwoord moet worden.)

• Als er één van de weefselantistoffen is aangevraagd (bv. AMA), komt deze bepaling open in ZenitHUB IFA. Je kan deze analyse antwoorden. Als er een ander patroon positief is dan oorspronkelijk aangevraagd, kan je klikken op + ASSAY en de bepaling selecteren.
• Een zelf toegevoegde bepaling is te herkennen aan het handje.

• Indien de analyse weefselantistoffen volledig negatief is, kan je dit met één knop antwoorden.

10. Kalibratie

Niet van toepassing

11. Onderhoud

11.1 Dagelijks onderhoud voor run

• Sluit de tube van de buffer 1 aan op de bufferfles (groen), vul bij indien nodig. Leng 1 flesje PBS buffer concentraat aan tot 1L met gedestilleerd water. De flesjes concentraat kunnen kristallen bevatten, laat deze eerst op kamertemperatuur komen.
• Wash fles (zwart) bijvullen met AD.
• Buffer 2 (blauw) wordt niet gebruikt. Deze is gevuld met AD.
• Tafel van slides reinigen met een compres met ethanol.
• Zuignapje van dekglaasjes reinigen met een compres met ethanol.
  

• Klik op de home pagina op ‘Shutdown’.
• Klik op ‘Yes’.
• Het toestel vraagt om een end of day wash uit te voeren, klik op ‘Yes’.
• Duid bij 'choose tanks' buffer 1 en wash aan (buffer 2 wordt niet gebruikt).
• Sluit de tubing van buffer 1 aan op de wash tank.
• Klik op ‘execute’.
• De end of day wash duurt 3,5 min. Het toestel sluit automatisch af.
• Start het toestel terug op.
• Maak de waste fles leeg.
• De slides worden 2 weken bijgehouden. Er zijn 2 kaften met de slides van even en oneven weken.

• Alle flessen (wash, buffer en waste) leegmaken en uitspoelen met gedestilleerd water.
• Nieuwe fles PBS buffer aanmaken (grote fles en klein flesje in toestel vervangen). Leng 1 flesje PBS buffer concentraat uit de kit aan tot 1L met gedestilleerd water. De flesjes concentraat kunnen kristallen bevatten, laat deze eerst op kamertemperatuur komen.
  

• De slides worden per week (even-oneven) bewaard in kaften. Op maandag worden de kaften van de runs 2 weken voordien leegemaakt.
  

• Reinig de 3 naalden achteraan met een compres met ethanol.
• Sluit de pc af.
• Start het toestel en de PC terug op
• Login op de PC en open de 3 MeLinDA programma’s
  

• Vul de washtank met een javeloplossing 1/10 (200ml javel + 1800 mL AD)
• Sluit de tubings van de buffers en wash aan op de washtank
• Voer een ‘end of day wash’ uit: kies buffer 1, buffer 2 en Wash en 2 cycles
• Klik op ‘Execute’
• Spoel de washtank uit met lauw kraantjeswater
• Vul de washtank met kraantjeswater
• Voer opnieuw een ‘end of day wash’ uit: kies buffer 1, buffer 2 en Wash en 2 cycles
• Spoel de washtank uit met AD
• Vul de washstank met AD
• Voer opnieuw een ‘end of day wash’ uit: kies buffer 1, buffer 2 en Wash en 2 cycles

12. Kwaliteitscontrole

12.1 Schema controles per run

Per run wordt er van elk type test een controle meegenomen (aanwezig in de kits). Dit enkel op de eerste slide en volgens onderstaand schema.

	Maandag	Dinsdag	Woensdag	Donderdag	Vrijdag
ANA	Negatief + Positief: Homogeen	Negatief + Positief: Homogeen	Negatief + Positief: Homogeen	Negatief + Positief: Homogeen	Negatief + Positief: Homogeen
ANCA	Negatief + Positief: p-ANCA	Negatief + Positief: c-ANCA	Negatief + Positief: p-ANCA	Negatief + Positief: c-ANCA	Negatief + Positief: p-ANCA

nDNA en LKS runs worden ingezet naargelang het aantal stalen, hierbij wordt steeds zowel de positieve als negatief kit controle meegenomen. (AMA controle bij LKS)

Het resultaat van de QC wordt na het aflezen automatisch doorgestuurd naar URT. (p-ANCA komt binnen onder level 2, c-ANCA level 3)

12.2 Instellen slide policy controles

Het instellen van de controle frequentie gebeurt op de ZenitPRO

• Configuration
• IFA test types
• Kies het juiste test type (de tests in gebruik staan op 'Enabled')
• Klik op 'Modify'
• In het tabblad 'Kit'
• Kies de juiste controle
• Klik op 'Modify'
• Pas de slide policy aan (first slide/none)
• Klik op 'Save'

13. Quality control in ZenitHUB

De kwaliteitscontroles kunnen opgevolgd worden in het programma ZenitHUB onder het tabblad 'Quality control' bij 'QC charts' (zie afbeelding). Dit per techniek (IFI/Blot/...) en pet kit (ANA/ANCA/...).

• Components zijn de kit controles. Je krijgt een pop-up om het level van controle te kiezen.
• Internal controls zijn eigen aangemaakte controles (bv. patiëntenpool)

14. Statistiekfunctie in ZenitHUB

Onder het tabblad 'Statistics' kunnen er statistieken bekeken worden op basis van verschillende filters:

• Datum (From ... To ...)
• Analyzer (ZenitPRO/Bluediver II)
• Origine (Lier, Bonheiden, Vilvoorde, Mechelen)
• Techniek (IFI, Blot,...)
• Assay (ANA, ANCA,... )

15. Serotheek (serum bank) in ZenitHUB

In het programma ZenitHUB kan er onder het tabblad 'Serum bank' een serotheek worden aangemaakt. Hier kunnen makkelijk alle stalen worden opgeslagen (Zie 15.1 Archiveren van stalen) en worden opgezocht (Zie 15.2 Opzoeken van stalen). De serotheek kan up-to-date gehouden worden door de verschillende 'grids' te beheren (Zie 15.3 Grids aanmaken en 15.4 Grids verwijderen). Hier wordt voorlopig geen gebruik van gemaakt. De stalen uit de routine worden gearchiveerd in een excel bestand op de Public.



15.1 Archiveren van stalen

• Klik op het symbool met de proefbuizen.
• Kies de grid waarin je stalen wilt archiveren.
• Scan het staalnummer of geef het staalnummer manueel in bij ID en druk op enter.
• Er verschijnt een pop-up met de positie waar het staal moet gearchiveerd worden.

• Klik op het symbool met de verrekijker.
• Scan het staalnummer of geef het staalnummer manueel in bij ID en druk op enter.
• De positie waar het staal gearchiveerd is wordt links onderaan het scherm weergeven.

• Log in op ZenitHUB.
  • User: menarini
  • Password: Mendia2018*
• Er verschijnt een pop-up waar je je eigen naam moet inbrengen (traceerbaarheid).
• Ga naar de tab 'Configuration'.
• Klik op de 'Serum bank' tab.
• Hier zie je alle vriezers/ijskasten met grids die reeds aagemaakt zijn.
• Sleep de nieuwe lege grid van links naar een bestaande vriezer/ijskast rechts.
• Geef de grid een naam.
• Geef de juiste afmetingen in:
  • Dimensions: 6x12
  • Max tube diameter: 13mm
  • Rows: 6
  • Columns: 12
• Vink het vakje 'Alphabetical row ID' aan.

• Log in op ZenitHUB met
  • User: mernarini
  • Password: Mendia2018*
• Er verschijnt een pop-up waar je je eigen naam moet inbrengen (traceerbaarheid).
• Ga naar de tab 'Confiuguration'.
• Klik op de 'Serum bank' tab.
• Sleep de grid of de vriezer/ijskast die je wilt verwijderen naar de vuilbak (links).

Bij het verwerken van de resultaten kunnen er bepaalde symbolen verschijnen bij de stalen:


Dit geeft aan dat er tijdens een run een probleem was met het staal. Het staal dient herhaald te worden in een volgende run.
Indien dit teken bij de controle staat wilt dit zeggen dat de index buiten de range valt.


Dit icoon geeft aan dat er overbelichting was (bij zeer sterk fluorescerende monsters). De ZenitPRO heeft een kortere belichtingstijd gebruikt waardoor de fluorescentie op het scherm wordt afgezwakt.


Dit icoon geeft aan dat de cuttoff grenzen van de QC zijn aangepast door de gebruiker. (bv. bij eigen contoles)

16.2 Opnieuw doorsturen bij connectieproblemen

Het zou kunnen voorvallen dat de resultaten niet zijn doorgestuurd van het toestel naar de software ZenitHUB IFA, omwille van connectieproblemen, melinda achtergrondprogramma's die niet open staan ... Dit kan over een hele run gaan of over één enkele afbeelding die niet zichtbaar is in de ZenitHUB IFA. Indien dit voorvalt kan je het volgende proberen op het toestel zelf:

• Klik op Validation
• klik op de run die niet doorgestuurd is
• Klik op het postbak symbooltje (Send to LIS)

• Klik op 'Workplan' om de lijst van de run door te sturen naar ZenitHUB iFA, klik vervolgens op 'Prevalidation' om de beelden door te sturen. (Het duurt enkele minuten op een hele run door te sturen)

1. Noteer met potlood op de slides de correcte volgorde/posities op de tray.

2. Verwijder manueel de eventueel nog aanwezige buffer op de slides (tik het glaasje met de zijkant op een doekje). Breng op elke well een klein druppeltje mounting medium aan en vervolgens het dekglaasje.

3. Leg de slides op dezelfde volgorde/positie op de tray.

4. Open nu ZenitHUB:

- Daily work

- Scan only

- Selecteer de juiste/laatste sessie en klik deze aan







5. Ga nu op het toestel ZenitPRO.
- Klik op “scanning”

- Show sessions

- Selecteer de correcte run



- Klik op New working session from selected

- Volg nu de stapjes door op next te klikken

- Om de correcte werklijst te koppelen aan deze sessie klik je op “Autosign” (=toverstafje). Op deze manier is elke well aan het juiste staaltje gekoppeld. Dit kan je even nakijken. Vervolgens klik je weer next tot je de run kan opstarten.

17. Bijlagen

Bijsluiters:



Informatie van de firma:

Gerelateerde documenten

1. FORM.OPL.73: "OPLEIDINGSFICHE CORE: ZENIT HUB"
2. STK.SER.17: "ZENIT PRO: VERKORTE WERKWIJZE"
3. STK.SER.18: "ZENIT PRO:PATRONEN ANA"
4. STK.SER.19: "ZENIT PRO:PATRONEN ANCA"
5. STK.SER.20: "ZENIT PRO:PATRONEN WEEFSELANTISTOFFEN"
6. STK.SER.21: "ZENIT PRO:AFLEZEN nDNA"